1. 일반적으로 사용되는 염색 방법에는 그람 염색(가장 기본), 포자 염색, 캡슐 염색, 편모 염색 등이 있습니다.
II.1 그람염색법 (1) 황색포도상구균과 대장균이 함유된 혼합세균액을 도말하고 건조하여 고정한다. (2) 염색 : 1회염색액을 사용한다. 1분 동안 물로 헹구고, 1분간 루골 요오드 용액으로 염색한 후, 0.4 푹신 알코올 용액으로 30초 동안 염색하고, 물로 헹구고 건조시킨 후 현미경 검사를 한다[2].
1.2 항산성염색법 (1) 결핵균 양성인 도말검체(가공품)를 채취하여 건조 후 고정한다. (2) 염색 : 석탄산푹신염료용액을 끓는 물에 10분간 담그고 2~3방울을 넣어 5분간 균막을 덮은 후 물로 헹구고 3염산알코올로 30초간 탈색시킨 후 물로 헹구어낸다. ; 알칼리성 멜라닌으로 30초간 대조염색하고 물로 헹굽니다. (3) Blot dry 후 현미경 검사를 실시한다[3].
1.3 캡슐염색법 (1) 폐렴구균을 접종한 후 사망한 생쥐의 복막액을 도말하여 건조시킨 후 고정시킨다. (2) 염색 : 카르볼산-푹신으로 염색한다. 1분 동안 물로 헹구고, 5초 동안 알코올로 탈색하고 물로 헹구고, 20% 탄닌산 용액으로 매염하고 10분 동안 물로 헹구고, 1분 동안 물로 헹굽니다. 얼룩을 건조시킨 후 현미경 검사를 받습니다[4].
1.4 포자염색법 (1) 파상풍균 혐기성 배양액과 5% 말라카이트그린 수용액을 동량 취하여 작은 시험관에 넣어 잘 섞은 후 끓는 물에 담근다. 20분 동안 상기 혼합물을 도말하고 건조시키고 고정시킨다. (2) 1 사황(Sa Huang) 용액으로 10분간 대조염색하고, 물로 헹구는다. (3) 건조 후 현미경 검사.
2.1 그람염색 황색포도상구균은 현미경으로 보면 보라색으로 염색되며 구형인 그람양성균이고, 대장균은 붉은색으로 염색되며 막대모양인 그람음성균이다. 그람 염색은 세균학에서 가장 고전적이고 널리 사용되는 염색 방법 중 하나입니다. 탈색은 그람 염색에 영향을 미치는 핵심 단계이며, 탈색 시간은 염색 결과의 정확성과 직접적인 관련이 있습니다[5]. 탈색이 과도하면 그람양성균이 그람음성균으로 오인될 수 있으며, 탈색이 충분하지 않으면 그람음성균이 그람양성균으로 오인될 수 있어 학생들이 파악하기 어렵습니다. 기존의 4단계 염색법은 이제 3단계 염색법으로 변경되었습니다. 즉, 3단계 알코올 탈색과 4단계 푹신 대조염색을 하나의 단계로 통합한 것입니다. 0.4 푹신 알코올 용액을 대조염색제로 사용하면 됩니다. 탈색 및 대조 염색. 이중 목적. 이를 통해 학생들은 4단계 방법으로 탈색 시간을 익히기 어려움으로 인한 염색 실패를 방지하고, 반복적인 실험을 줄여 교습 효과를 높일 수 있습니다.
2.2 항산성 염색 현미경으로 보면 결핵균은 빨간색으로 염색되는 항산성 세균이고, 다른 세균은 파란색으로 염색되는 비항산성 세균입니다. 전통적인 방법은 석탄산-푹신 염료를 도말 위에 떨어뜨린 후 유리 슬라이드로 도말을 잡고 담배 잎과 함께 가열한 다음 약 5분 동안 염료 용액을 증기로 유지하는 것입니다. 이 방법은 염료 용액을 쉽게 증발시킬 수 있습니다. 또는 염료가 증발하여 액체가 끓어 염색 효과에 영향을 미치고 환경을 오염시킵니다. 개선된 방법은 염료 용액을 직접 가열하여 수조에서 사용하는 것인데, 이는 위의 단점을 극복하고 좋은 염색 결과를 얻습니다. 실험 교육에 적합합니다.
2.3 캡슐 염색 현미경으로 보면 폐렴구균 세포는 붉은색(쌍으로 배열)으로 염색되고, 캡슐은 녹색으로 염색되어 세포 주변에 존재합니다. 전통적인 캡슐 염색은 크리스탈 바이올렛 염색액을 사용하는데, 세균은 보라색으로 염색되고, 캡슐은 연보라색 또는 무색으로 염색되어 세균과 캡슐의 대비가 작아 구별이 어렵다. 개선 후 탈색, 매염, 대조염색 단계를 추가하여 세균과 캡슐의 대비를 높여 관찰이 용이하게 하였으며, 학생 실험 및 교육용 필름 제작에 활용할 수 있습니다.
2.4 포자 염색 현미경으로 보면 파상풍균 세포는 빨간색으로 염색되고 포자는 녹색으로 염색됩니다. 전통적인 방법은 석탄산-푹신 염료를 도말 위에 떨어뜨린 후 약한 불로 가열하여 염료가 5분 정도 찌는 방식이다. 이 방법은 염료의 양이 많아 의류와 실험대를 쉽게 오염시킬 수 있다. 지금의 방법은 수조에서 세균용액과 염료용액을 혼합하고 가열하여 1차염색을 한 후 도말, 고정, 대조염색을 준비하는 방법으로 시간이 절약되고 염료소모가 적으며 세균과 포자의 선명한 대비를 제공하는 방법이다. 이 방법은 교시편 제작에 적합합니다.
3. 단순 염색은 단일 염료를 사용하여 박테리아를 염색하는 방법입니다.
작업 단계
1. 도말 : 멸균되고 냉각된 접종 루프를 사용하여 소량의 세균을 골라낸 후 물방울과 잘 섞어 매우 얇은 세균막을 형성합니다.
2． 건조 : 자연 건조하거나, 도말을 센 불에 올려 약한 불로 건조할 수 있으나 불에 직접 구울 수는 없습니다.
3． 고정 : 세균막이 있는 쪽이 위로 오도록 슬라이드 유리의 한쪽 끝을 잡고 재빠르게 불꽃에 2~3회 통과시킵니다(손이 타는 것을 방지하기 위해 도말 뒷면을 손가락으로 만지세요).
4． 염색 : 크리스탈바이올렛 염색액(또는 카르볼산-푹신액) 적당량(세균막을 덮어 측정)을 첨가하고 1~2분간 염색한다.
5． 물세척 : 흐르는 물에 염색액의 색이 없어질 때까지 수돗물로 헹굽니다.
6. 건조
7. 현미경 검사